01 / 确认样本与成像条件
核对组织前处理、目标标志物及设备光学配置，确定对照和采集方式。
mIHC / HRP–TSA
九色多重荧光染色试剂盒
在同一张切片，
逐层读出多种标记。
九色多重荧光染色试剂盒 Plus，采用 8 个 TSA 荧光通道加 DAPI，在同一张切片上开展 8 个蛋白标志物的顺序染色。结合样本、抗体组合与成像条件，建立 mIHC / mIF 实验流程。
信号沉积 / 逐轮标记01 / OVERVIEW
HRP-TSA：保留信号，逐轮扩展
在同一张切片上逐轮沉积信号
本产品基于 HRP-TSA（Tyramide Signal Amplification）原理：HRP 催化 tyramide 荧光分子在靶标附近沉积，每轮染色后去除抗体复合物，再进入下一轮标记。顺序染色将多个蛋白标志物放在同一组织结构中观察。
八标九色，如何计数？
8 个蛋白标志物对应 8 个 TSA 荧光通道，另加 DAPI 细胞核复染，共 9 色。适合在有限组织面积中研究多标共表达、细胞表型和空间关系。
| 荧光体系 | 通道配置 | 说明 |
|---|---|---|
| TSA 荧光通道 | 480 / 520 / 540 / 570 / 620 / 650 / 700 / 780 | 用于 8 个蛋白标志物的信号沉积。 |
| 细胞核通道 | DAPI | 用于核定位与细胞识别。 |
480、520 等为染料通道标识，不等同于精确的激发或发射峰值。光学参数应按对应染料技术文件核对。
02 / KIT
染色体系与样本选择
按实验功能准备试剂
HRP-TSA 工作流涉及荧光信号沉积、抗体检测、背景控制、核染与封片。下表帮助理解各类试剂的作用；产品随附项目、适用二抗种属及数量以实际产品清单和技术手册为准。
| 实验功能 | 相关试剂 | 用途 |
|---|---|---|
| 荧光信号沉积 | TSA 荧光染料、TSA Reaction Buffer | 提供荧光底物及酶促反应环境。 |
| 抗体检测 | 匹配种属的 HRP 标记二抗、抗体稀释液 | 衔接一抗识别与 TSA 信号催化。 |
| 背景控制 | 过氧化氢封闭液 | 阻断内源性过氧化物酶活性。 |
| 核染与封片 | DAPI 核染液、抗淬灭封片剂 | 细胞核复染、封片及信号保护。 |
已有应用：FFPE 组织与组织芯片
已实际开展 FFPE 石蜡组织切片、肿瘤等科研组织及 FFPE 组织芯片（TMA）的多重免疫荧光和多轮 TSA 顺序染色。具体 Panel 仍需结合固定、切片保存和抗体表现优化。
需要单独评估：冻切与固定细胞
冰冻组织切片、固定细胞、细胞爬片和涂片可先评估固定、抗原修复、通透及抗体条件，不能直接套用 FFPE 流程。
03 / WORKFLOW
先设计，再进入多轮染色
从单标验证到多轮组合
02 / 单标验证与抗体优化
分别优化一抗浓度、孵育条件、抗原修复和背景控制，再决定染料分配及染色顺序。
03 / 顺序 TSA 染色
依次进行一抗、匹配 HRP 二抗、TSA 信号沉积和抗体去除，再进入下一轮标记。
04 / DAPI 与多通道成像
完成核染、封片及成像质控；高多色实验优先结合光谱拆分，评估串色及自发荧光背景。
同种属一抗可结合经过验证的顺序染色和抗体去除流程设计 Panel，但不代表任意抗体组合都可直接使用。多轮修复或洗脱可能影响部分表位，弱表达及核定位蛋白尤其需要单独优化。
已使用的成像平台
本体系已有 Thermo Fisher Scientific EVOS S1000 Spatial Imaging System 的成像应用，结合荧光采集与光谱拆分完成多通道图像采集、组织扫描及后续分析。
其他荧光显微镜或多光谱系统能否完成完整九色采集，取决于激发光源、检测范围、滤光片及拆分能力。成像平台的多色能力不代替本试剂盒在具体 Panel、样本与设备组合下的验证。
04 / ANALYSIS
从多标图像到空间信息
适合研究哪些问题？
肿瘤免疫微环境
在同一组织中观察肿瘤、T 细胞、巨噬细胞及其他目标群体的表型与分布。
多标共表达与组织邻域
保留组织结构，分析标志物组合、区域差异和细胞邻近关系。
有限切片上的多指标观察
在珍贵样本中整合多个标志物，减少连续切片间的组织位置偏差。
试剂盒、成像与分析分别确认
试剂盒用于搭建染色体系；成像设备的配置决定采集能力；细胞分割、表型定义及空间统计属于后续分析工作。需要委托染色、扫描或分析时，可通过本页咨询入口沟通具体服务范围。
原始图像、单通道与合并图、细胞表型及空间定量结果的获取方式，应随实验和分析方案确认。
ORIGINAL MATERIAL / 原有资料
保留完整的
产品与应用资料。
原版资料用于了解产品与应用背景；产品配置以本页通道说明、产品技术手册及实际随附清单为准。
QUESTIONS / 实验准备
开始前，
再确认几个问题。
“八标九色”是怎样组成的？
8 个蛋白标志物对应 480 / 520 / 540 / 570 / 620 / 650 / 700 / 780 八个 TSA 荧光通道，另加 DAPI。通道名称不直接代表精确激发或发射峰值。
适合哪些样本？
已有 FFPE 组织切片和 FFPE 组织芯片应用。冻切、固定细胞、细胞爬片或涂片需另行评估前处理与抗体条件。
能把任意同种属一抗组合起来吗？
顺序染色与抗体去除可提高同种属一抗组合的灵活性，但每个抗体及组合仍需验证浓度、顺序、表位耐受性和背景。
普通荧光显微镜能完整采集九色吗？
需按设备的激发、检测和滤光片配置评估，不能保证所有荧光显微镜均可完成。本体系已有 EVOS S1000 应用，高多色实验优先使用具有光谱拆分能力的成像设备。
购买试剂盒会同时包含染色、扫描和空间分析服务吗？
这些属于不同环节。产品随附项目按实际清单和技术手册确认；委托实验、设备采集或分析服务请另行沟通项目范围。
如何确定包装规格和配套试剂？
请提供样本、计划染色数量、目标标志物和成像平台，沟通所需产品配置及配套实验条件；正式规格以产品技术手册和随附清单为准。
NEXT STEP / 两条实验路径
您想从哪一步开始？
有样本，需要委托检测
带上研究问题、样本类型、数量与分组，讨论Panel、染色、成像与分析。
了解mIHC服务沟通检测项目有实验平台，需要试剂与方案
说明现有仪器、目标标记和实验条件，确认试剂、资料与适配范围。
比较三套预设 Panel咨询试剂与实验配置